Odgovor:
GAPDH se često koristi kao kontrola punjenja.
Obrazloženje:
U Western blotingu često koristimo GAPDH kao kontrolu punjenja. To znači da sondiranjem GAPDH-a možemo provjeriti imamo li napunjene ekvivalentne količine proteina na različitim stazama blota.
Primjer uporabe - kažemo da imamo bolest za koju mislimo da uzrokuje povišenje određenog proteina u stanici. Napravili bismo uzorak od "zdravih" stanica i drugog uzorka iz "oboljelih" stanica. Tada bismo na gelu za Western blot učitali ekvivalentne količine proteina oba uzorka.
Nakon što smo probali blot za naš interesni protein, otkrili smo da je u bolesnim stanicama razina proteina doista povišena (to je tamniji pojas koji se stvara na blotu). Da bi se dokazalo da je ovo povećanje proteina posljedica promjene ekspresije u stanici, umjesto artefakta opterećenja (to jest, intenzivniji pojas uzrokovan je promjenom ekspresije proteina u stanicama, a ne slučajnim učitavanjem više "uzorka bolesti" od "zdravog") također bismo ispitali mrlju za GAPDH kako bismo pokazali da su ukupne razine proteina iste u obje trake.
Na taj način pokazujemo da je ekvivalentni protein napunjen u dvije trake i da je promjena intenziteta trake koju promatramo zbog promjena u ekspresiji proteina za interesni protein.
Zašto se koristi formalna naknada? + Primjer
Zato što nam to daje ideju elektroničke strukture. Naravno, formalna optužba je formalizam. To jest, nema nikakvog stvarnog postojanja, ali koncept može biti koristan za razumijevanje strukture i povezanosti. Vrlo smo rano upoznati s idejom da je "kovalentno vezanje" rezultat dijeljenja elektrona i "ionskog vezanja" iz prijenosa elektrona. Prema tome, neutralna molekula metana, CH_4, nema razdvajanja naboja, a ionska vrsta NaCl može se predstaviti kao Na ^ (+) Cl ^ (-). Da bi se metan zadržao kao primjer, molekula metana ima ukupno 10 elektrona: 6 od C i 4 iz H. Za ugljik, 2 njegova elektrona su unutarn
Zašto se koristi genetski modificirana hrana? + Primjer
Mnogo razloga - uglavnom da nas sve hrane. Genetski modificirana hrana ide pod grane GMO - genetski modificiranih organizama. Postoje mnoge prednosti, ali potencijalne opasnosti od konzumiranja GMO-a - ovi razlozi su razlog zašto ih koristimo. Preći ću glavne. Ako odete u svoj supermarket i kupite hranu iz dijela svježeg voća, 90% hrane je genetski modificirano. To je zato što ljudska populacija raste i treba nam više hrane da bismo nahranili sve nas. Dakle, metoda za modificiranje DNK hrane omogućuje veće voće, brzu reprodukciju i veću prehrambenu dobrobit. Primjer bi uključivao kukuruz: Što se tiče padova, jer mijenjamo
Zašto se Western blot koristi za potvrdu elise? + Primjer
Obično je to test specifičnosti antitijela. U ELISA-i je vrlo teško odrediti da li se vaše antitijelo veže za vaš interesni protein, potpuno različit protein ili niz proteina. Western blot će se koristiti za provjeru specifičnosti antitijela (treba imati na umu da Western blot ne može otkriti sve unakrsne reakcije s netočnim proteinima). U Western blot-u možete vidjeti veličinu proteina na koji je antitijelo vezano (ne možete u ELISA-i). Stoga, na primjer, ako vaše antitijelo treba biti vezano za protein od 56 kDa i vidite traku na ~ 56 kDa na blotu, tada možete biti razumno sigurni da se antitijelo veže na ispravan protei