Kako znanstvenici izoliraju DNK da bi je proučili?

Kako znanstvenici izoliraju DNK da bi je proučili?
Anonim

Odgovor:

Postoji nekoliko koraka za to, zanemarite moj loš engleski, nadam se da još uvijek možete razumjeti proces.

Obrazloženje:

To nije tako teško kao što mislite.

Recimo da želimo izolirati DNA iz telećeg timusa, morate slijediti ove upute (oni su isti za jabuku koliko ja znam, ali postoje male varijacije):

  1. Uzmite 3 komada od 3 grama i izrežite ih u sitnim komadićima, što je moguće manje.

  2. Stavite ga u miješalicu s 75 ml slanog natrijevog citrata (SSC) po komadu i provjerite je li nož blendera potpuno prekriven SSC-om, pa dodajte komadić timusa ako je potrebno.

    SSC osigurava da se stanične membrane rastvore.

    Nastavite miješati dok sve ne postane glatko.

  3. Stavite ga u epruvetu za centrifugu i tare s drugom cijevi tako da se centrifuga ne slomi

  4. Stavite epruvetu u centrifugu 20 minuta na 5000 okr / min

  5. Kada izvadite cijevi iz centrifuge, trebate vidjeti dvije komponente. Dno ima čvrstu tvar, to se zove pelet i to drži jezgre stanice s DNA. Također ćete vidjeti tekuću tvar, koja se naziva supernatant i koja se sastoji od SSC-a s otopljenim staničnim membranama.

  6. Izlijte supernatant jednim pokretom tekućine, to se naziva dekantiranje i to ostavlja s peletom.

  7. Stavite malu količinu 2,2 M NaCl u epruvetu s peletom, tako da je pelet tek prekriven s NaCl. NaCl uzrokuje taloženje proteina koji okružuju DNA.

  8. Promiješajte s praznom epruvetom ili štapom za miješanje. Na kraju bi trebali dobiti dvije komponente. Proteini na dnu i viskozna tekućina na vrhu.

  9. Izvadite viskoznu tekućinu s pipetom i pazite da ne uzimate proteine s viskoznom tekućinom. (vrlo male dijelove proteina vrlo je teško izbjeći, ali pokušajte izbjeći što je moguće više proteina)

  10. Stavite viskoznu tekućinu koju ste pipetirali u čašu i dodajte joj 2 puta više etanola. Ali dodajte etanol nježno jer ga ne želite miješati s DNK. Na sučelju između etanola i viskozne tekućine trebate vidjeti mjehuriće DNA.

  11. Lagano promiješajte sa staklenom šipkom, DNA je negativno nabijena tako da se treba zalijepiti za štap.

  12. Stavite ga u epruvetu i otopite sa SSC.

Poseban stroj može vam reći koliko ste DNK izolirali i koliko je čista.