Zašto se restrikcijski enzimi čuvaju u 50% -tnoj otopini glicerola?

Zašto se restrikcijski enzimi čuvaju u 50% -tnoj otopini glicerola?
Anonim

Odgovor:

Da bi ostali netaknuti …

Obrazloženje:

Restrikcijski enzimi koriste se u vrlo malim količinama, ali se obično kupuju u nešto većim serijama.

Ako ništa drugo, obično radite različite testove s istom skupinom. Kupljena serija stoga se mora čuvati duže vrijeme.

Većina enzima je savršeno sretna u svom puferu na 4 stupnja Celzijusa neko vrijeme, ali će se na kraju degradirati. 24 sata je obično prihvaćeno ograničenje.

Za duže skladištenje serija mora biti zamrznuta. -20C je standard i zadržat će ga nekoliko mjeseci. Za još dulja razdoblja (npr. Jedna ili više godina) -70C je norma.

Potrebno ga je brzo zamrznuti i to u malim spremnicima (npr. Eppendorfs) kako bi se izbjeglo prečesto odmrzavanje / zamrzavanje.

Da bi se izbjeglo oštećenje proteina na tako niskim temperaturama, mogu se dodati / dodati stabilizatori, kao što su DTT (Di-Thio-Treitol), Serumski albumin i, najvažnije, glicerol (5-50%).

Začudo, na -20C potrebno je koristiti 50% glicerola, dok na -70 Glycerol nije stvarno potreban, iako dodatak može pomoći stabiliziranju proteina.