Odgovor:
Pročistiti frakciju proteina …
Obrazloženje:
Ako pročišćavate (često specifičan) protein, morat ćete se riješiti što više smeća koje bi mogle biti povezane s njima.
To u određenoj mjeri ovisi o tome koji protein tražite, ali općenito je to dobra ideja, posebno u pripremni pročišćavanje, da se riješi što je moguće više nečistoća.
1:
Kako su bjelančevine općenito velike i posljedično će se pojaviti u nižim trakama vaše (ultracentrifugirane) frakcije, želite se riješiti bilo kakvih nukleinskih kiselina, osobito ako se proteini koje ste proglasili odnosi na Pol1, Obrnuta transkriptaza ili bilo koji drugi enzim uključen u replikaciju / transkripciju / prevođenje.
Nukleinske kiseline prisutne u uzorku možete odvojiti pomoću DNAse: to će u potpunosti hidrolizirati DNA u sastavne dijelove.
Imajte na umu, postoje različiti DNK-ovi, koji se razlikuju u svom mehanizmu i specifičnosti za svoj supstrat. Ovisno o korištenom DNK, može se pokazati Endo- ili exo- aktivnost nukleacije …
Još važnije, RNAsom RNA je više prikladna, jer je RNA obično više unutar raspona uzgona / frakcija proteina, i može biti vezana za protein.
2:
lizozim: Enzim koji ima najmanje dvije funkcije:
To deglycosylates enzima: Većina proteina nošenih u krvotok su glikozilirani: oni imaju nekoliko molekula šećera na njih. Lizozim će ukloniti ostatke šećera.
Također ima sposobnost razbijanja stanične stijenke gram-pozitivnih bakterija, uzrokujući tako liziraj, (ako želite pročistiti protein iz gram-pozitivnih bakterija)
Svi degradirani proizvodi, bilo nukleinske kiseline ili ostaci šećera, pojavit će se na gornjim frakcijama Centrifugalne cijevi zbog njihove "lakše" uzgonosti.
Koji su neki od primjera metoda pročišćavanja proteina?
Taloženje dijalizom Membranska filtracija Ako znate izoelektričnu točku proteina, možete se taložiti i filtrirati ili centrifugirati proteinsku frakciju podešavanjem pH. Proteini su prilično velike molekule, a dijaliza ili membranska filtracija mogu se upotrijebiti za uklanjanje nečistoća koje će lako proći kroz pore membrane dok zadržavaju proteinsku frakciju.
Zašto su potrebni deterdženti za ekstrakciju integralnih membranskih proteina, ali ne i perifernih membranskih proteina?
Vanjski ili periferni proteini se labavo drže u membrani, njihovo uklanjanje je lako. Mogu se jednostavno ukloniti promjenom pH. Intrinzični proteini duboko su uklopljeni u membranu, pa su stoga za njihovu izolaciju potrebni deterdženti.
Sojin obrok je 12% proteina, kukuruzno brašno 6% proteina. Koliko kilograma svakog treba pomiješati kako bi dobili 240-b smjesu koja je 7% proteina? Koliko kilograma kukuruznog brašna treba biti u smjesi?
Jedina razlika između ovog pitanja i http://socratic.org/s/aAWWkJeF je stvarna vrijednost koja se koristi. Koristite moje rješenje kao vodič za rješavanje ovog problema. Pokazao sam dvije metode pristupa.