Odgovor:
kako bi se omogućio pravilan prijenos proteina na Western blot membranu
Obrazloženje:
kada se SDS-PAGE završi, gel se uklanja iz lijevanog sloja, a zatim se napravi Western blot, kao što je prikazano na slici, nakon što se postava završi, nanosi se električni naboj s proteinskim gelom na negativnoj strani i membrani na pozitivnoj strani. kada je ova postavka potpuna, proteini se prenose na membranu zbog primijenjenog električnog polja.
budući da se primjenjuje konstantno električno polje, ako mjehurići puzaju između gela i membrane, tada protein neće moći prenijeti na membranu zbog sljedećeg razloga
- postoji praznina između membrane i gela gdje se nalazi mjehurić, on neće moći održavati električno polje jer je električno polje unutar šuplje kugle jednako nuli, što je ovdje naš zračni mjehur.
jer je električno polje potrebno za prijenos proteina na membranu, ali zbog zračnog mjehurića nema električnog polja, tako da nema prijenosa proteina
Svi vi ljudi su dobrodošli da ažurirate odgovor
Živio!
Učenicima je rečeno da ne koriste osobne zamjenice poput "vi" u svom akademskom pisanju. Zašto bi pisci trebali izbjegavati osobne zamjenice?
To je neformalno. Formalno pisanje treba koristiti samo treću osobu (ne ja, mi, vi, vaš, moj, ja, itd.). Autori ne bi trebali pisati kao da razgovaraju s čitateljem. Oni mogu koristiti "jedan" za upućivanje na ljude. Osobne zamjenice on, ona, ona i one se mogu koristiti. Obično govorimo i šaljemo tekst / e-poštu (naravno, postoje iznimke) neformalno. Učenici ne bi trebali pisati kao da razgovaraju s bliskim prijateljem / članom obitelji. Primjer: Čovjek se može zapitati zašto ... umjesto da se pitate zašto ...
Što bi mogao biti problem ako se bendovi ne pojavljuju u Western Blotu?
Mnogo ... Postoji mnogo razloga zašto se bendovi možda ne pojavljuju na zapadnjačkom blotu. Jesu li kombinacije uzoraka i antitijela radile u prošlosti? Ispod su samo neki od kojih se mogu sjetiti u ovom trenutku koji mogu uzrokovati da se bendovi ne pojave: Je li protein prebačen iz gela? Pokušajte obojiti membranu s nečim poput ponceau S ili amido crne da vidite jesu li prisutne trake. Ponekad možete vidjeti proteinske vrpce na membrani tako da ih navlažite i držite pod kutom prema svjetlu. Djeluje li primarno antitijelo? Ovo je teško testirati i jedini način na koji to možete je uključivanje pozitivne kontrole tamo gdje
Zašto se GAPDH koristi u Western Blotu? + Primjer
GAPDH se često koristi kao kontrola punjenja. U Western blotingu često koristimo GAPDH kao kontrolu punjenja. To znači da sondiranjem GAPDH-a možemo provjeriti imamo li napunjene ekvivalentne količine proteina na različitim stazama blota. Primjer uporabe - kažemo da imamo bolest za koju mislimo da uzrokuje povišenje određenog proteina u stanici. Napravili bismo uzorak od "zdravih" stanica i drugog uzorka iz "oboljelih" stanica. Tada bismo na gelu za Western blot učitali ekvivalentne količine proteina oba uzorka. Nakon što smo probali blot za naš interesni protein, otkrili smo da je u bolesnim stanicama