Odgovor:
Upotreba antitijela za detekciju proteina koji su odvojeni pomoću SDS-PAGE i zatim preneseni na membranu.
Obrazloženje:
Stanice sadrže mješavinu proteina (mnogo tisuća) i one se mogu odvojiti pomoću SDS-PAGE.
Proteini iz SDS-PAGE se zatim prenose, upotrebom električnog polja, iz gela na membranu tipično načinjenu od nitroceluloze ili poliviniliden fluorida (PVDF).
Membrana se ispituje s primarnim antitijelom specifičnim za protein od interesa. Zatim se koristi sekundarno protutijelo za detekciju primarnog antitijela. Sekundarno antitijelo će sadržavati marker koji se može detektirati kemijskom reakcijom, bilo da daje vidljivu traku na membrani, ili signal koji može biti uhvaćen od strane specijalizirane kamere.
Ako je potrebno, mogu odgovoriti na ovaj odgovor u velikoj mjeri, jer sam tijekom svoje karijere izveo nekoliko stotina Zapadnih mrlja.
Što je Western blot HIV test?
Enzimski imunosorbentni test (ELISA), također poznat kao enzimski imunološki test (EIA). Serija krvnih pregleda provodi se radi testiranja na HIV. Enzimski imunosorbentni test (ELISA), također poznat kao enzimski imunološki test (EIA), prvi je test koji će vaš zdravstveni djelatnik narediti pregledu HIV-a. ELISA, kao i Western blot test, otkriva protutijela HIV-a u vašoj krvi.
Što je Western Blot imunotest?
Western blot (protein imunoblot) je široko korištena analitička tehnika koja se koristi za otkrivanje specifičnih proteina u uzorku homogenata tkiva ili ekstrakta. Ključni elementi potrebni za postizanje ovog zadatka su: odvajanje smjese proteina po veličini pomoću gel elektroforeze. učinkovit prijenos odvojenih proteina na čvrstu podlogu. specifičnu detekciju ciljnog proteina pomoću približno odgovarajućih antitijela. Sposobnost zapadnih mrlja da jasno pokaže prisutnost specifičnog proteina, i po veličini i kroz vezanje antitijela, čini ih pogodnim za procjenu nivoa ekspresije proteina u stanicama za praćenje frakcija tij
Što bi mogao biti problem ako se bendovi ne pojavljuju u Western Blotu?
Mnogo ... Postoji mnogo razloga zašto se bendovi možda ne pojavljuju na zapadnjačkom blotu. Jesu li kombinacije uzoraka i antitijela radile u prošlosti? Ispod su samo neki od kojih se mogu sjetiti u ovom trenutku koji mogu uzrokovati da se bendovi ne pojave: Je li protein prebačen iz gela? Pokušajte obojiti membranu s nečim poput ponceau S ili amido crne da vidite jesu li prisutne trake. Ponekad možete vidjeti proteinske vrpce na membrani tako da ih navlažite i držite pod kutom prema svjetlu. Djeluje li primarno antitijelo? Ovo je teško testirati i jedini način na koji to možete je uključivanje pozitivne kontrole tamo gdje