Što je ionska izmjena kromatografije? + Primjer

Što je ionska izmjena kromatografije? + Primjer
Anonim

Odgovor:

To je proces za odvajanje različitih proteina na temelju njihovih naboja i svojstava vezanja za materijal.

Obrazloženje:

Kod različitih pH različitih proteina nose različite naboje. Postavljanjem mješavine proteina na zadani pH možete imati smjesu koja sadrži proteine s različitim svojstvima punjenja.

Ako se ova mješavina proteina izlije na stupac koji sadrži materijal s nabojem na njemu, kolona će vezati proteine unutar suprotnog naboja.

Zatim se mogu koristiti različite otopine koje sadrže različite količine iona za eluiranje (odlepljivanje) proteina iz kolone.

Na primjer, recimo da ste imali mješavinu proteina iz kojih želite pročistiti određeni protein. Ako ste znali da je na određenoj pH vrijednosti vaš protein od interesa bio pozitivno napunjen, mogli biste smjesu sipati na stupac koji sadrži negativno nabijeni materijal.

Svi proteini koji nisu nosili naboje, ili kada bi negativno nabijeni protjecali ravno kroz kolonu. Potom biste mogli osloboditi svoj pozitivno nabijeni protein popunjavanjem stupca pozitivnim ionima koji bi dovršili negativni naboj na stupcu. Ovo natjecanje bi onda uzrokovalo da se vaš protein od interesa eluira.

Evo primjera toga.

Svaka posuda sadrži pufer u različitoj koncentraciji i kao što se može vidjeti u uzorku od 175 mM (gornji lijevi kut) vrlo malo crveno / smeđih proteina vezano je za nabijenu membranu jer postoji konkurencija između iona u puferu i proteina za nabijena vezna mjesta na membrani (Ioni u puferu su "pobijedili" jer ih je više i tako su spriječili vezanje proteina). U uzorku u donjem desnom dijelu mnogo proteina veže se na membranu jer je manje prisutnih iona koji se natječu za vezna mjesta.

U ovom videu možete vidjeti kromatografiju izmjene aniona: