U ELISA testu, što rade primarna antitijela i sekundarna antitijela?

U ELISA testu, što rade primarna antitijela i sekundarna antitijela?
Anonim

Odgovor:

To ovisi o vrsti ELISA testa.

Obrazloženje:

ELISA = Enzimski povezani imunosorbentni test.

Postoje različite vrste ELISA testova. Ono što vam je potrebno je:

  • antitijela s vezanim enzimom
  • antigena na koje se antitijelo veže
  • supstrata enzima koji uzrokuje mjerljivu reakciju

enzim vezano na antitijelo je često HRP (peroksidaza hrena). HRP može reagirati s različitim supstratima koji ili mijenjaju boju ili emitiraju svjetlost, obje mjerljive.

Slika prikazuje pregled različiti tipovi ELISA testova. Objasnit ću kako rade dolje.

Izravna ELISA

Ploča je obložena antigenom (Ag) i a primarno antitijelo s enzimom. Kada se doda supstrat, dolazi do reakcije i proporcionalna je količini interakcija antitijela i antigena.

Indirektna ELISA

Ponovno, ploča je obložena s antigenom i a primarno antitijelo veže se na antigen. sekundarno antitijelo doda se da se veže na prvo antitijelo. 2. antitijelo sadrži enzim koji reagira sa supstratom.

Sendvič ELISA

Ovdje su uključena dva ili tri antitijela. Antitijelo za hvatanje pričvršćeno je na ploče i veže se na antigen. Nakon toga slijede isti koraci kao i izravno (samo jedno antitijelo) ili indirektna metoda (dva protutijela).

Konkurentna ELISA

Ponekad se naziva ELISA za inhibiciju, malo je kompliciranija. Ploča je obložena antigenom koji treba istražiti. primarno antitijelo s enzimom se prvo inkubira s uzorkom s nepoznatom koncentracijom istog antigena. To se zatim dodaje na ploču, dopuštajući da antitijela koja još uvijek slobodno reagiraju s antigenom na ploči. Nakon ispiranja kompleksa antitijela i antigena uzorka, doda se supstrat.

Kada nepoznati uzorak ima mnogo antigena, bit će manje slobodnih antitijela za vezanje na ploču = niži signal.