Zašto koristimo negativnu kontrolu u PCR-u?

Zašto koristimo negativnu kontrolu u PCR-u?
Anonim

Odgovor:

Pogledaj ispod

Obrazloženje:

PCR funkcionira izvan DNA uzorka. Recimo da testirate na HIV (HIV je RNA virus, ali kada se pretvori u stanicu, pretvara se u DNK …. tako da će HIV biti zaražena u zaraženoj stanici). Prajmeri koje upotrebljavate učinit će proizvod (amplikon) koji odgovara dijelu HIV DNA. Ako vidite ovaj amplikon, onda imate HIV sekvencu prisutnu ….. ali ako nemate negativnu kontrolu, možete imati kontaminaciju.

PCR je izrazito osjetljiv. Postoje mnoga rješenja koja se koriste u PCR-u (voda, pufer, dNTP, enzim) … i svi oni lako mogu biti kontaminirani s DNK iz drugih uzoraka, ili čak iz amplikona koji je načinjen u reakciji koju ste jučer napravili. Dakle, ako imate uzorak DNK pacijenta X i provjeravate je li HIV putem PCR-a, PCR prajmeri mogu napraviti produkt od DNA DNA u uzorku DNK pacijenta X (ako ta osoba ima HIV), ili to može učiniti izvan onečišćenje. Ali ne možete reći je li to od kontaminacije ili od HIV-a u DNK pacijenata.

Dakle, vodite kontrolu vode. Tube 1 stavite sve komponente reakcije, a za DNK dodajete samo vodu. To je negativna kontrola. Ništa se ovdje ne bi trebalo pojačavati. U Tube 2 stavite sve reakcijske komponente i DNA pacijenta X. Ako ovdje dobijete proizvod, (i ništa u epruveti 1), pacijent X vjerojatno ima HIV DNK u svojoj DNA. Ako dobijete proizvod u cijevi 1 i cijevi 2, imate problem kontaminacije i ne možete utvrditi je li HIV u uzorku pacijenta od bolesti ili od kontaminacije.

Dakle, uvijek vodite kontrolu vode (voda umjesto DNA).